濾色片是熒光測量顯微鏡的關(guān)鍵部件, 在測量顯微鏡中按其功能可分為激發(fā)濾色片和截止濾色片兩類。激發(fā)濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜, 以激發(fā)標本產(chǎn)生熒光。截止濾色片的功能是僅把標本上發(fā)出的熒光透過成像, 而將其它光阻擋不參與成像, 一般激發(fā)濾色片安置在緊靠光源, 而截止濾色片在物鏡與目鏡之間。
按其透過光譜特性曲線可分為“短波通過”、“長波通過”和“波段通過”濾色片。波段通過濾色片按波帶寬度又可分為“寬波帶”和“窄波帶”濾色片, 如果半寬帶(即HW = 50% 的透射峰的主透射帶的寬度之半)大于50nm , 視為“寬波帶型”; 若小于20nm , 則可視為“窄波帶型”。
濾色片初期用貯放玻璃盒中的有色液體, 后改用帶色膠質(zhì)片, 由于易變色和使用不方便已被淘汰。現(xiàn)在經(jīng)常使用的為色玻璃和干涉濾色片, 色玻璃大都屬寬波帶濾色片, 透過波段寬, 透過率隨厚度而降低, 價格相對低廉。由于色玻璃與空氣的界面上, 約有4% 光線被反射掉, 玻片愈多, 光能損失愈大, 限制了它的使用性能。干涉濾色片的出現(xiàn), 可按需要制成能透過或截止一定波段的濾色片, 從而促使熒光顯微術(shù)的進展, 現(xiàn)代技術(shù)上已能對某波段的透射率或反射率進行控制。
由此可見, 多數(shù)熒光色素和熒光發(fā)色團分子具有相當寬的吸收光波帶和熒光波帶, 峰值間隔又較大, 所以在需要得到強熒光時, 很少使用窄波帶濾色片, 因為它致使相當大的光源能量損失了(沒有利用) ,僅在光源的強發(fā)射譜線和激發(fā)時的吸收峰相重合時才使用。當使用寬波帶濾色片時, 往往組織成分和光路中的自發(fā)熒光會被這類濾色片中的短波光激發(fā)出來, 加到熒光圖象中而混擾。多數(shù)應(yīng)用中, 激發(fā)濾色片的半寬約20nm 就能給出滿意的結(jié)果。
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